• <table id="caaaa"><source id="caaaa"></source></table>
  • <td id="caaaa"><rt id="caaaa"></rt></td>
  • <table id="caaaa"></table><noscript id="caaaa"><kbd id="caaaa"></kbd></noscript>
    <td id="caaaa"><option id="caaaa"></option></td>
  • <noscript id="caaaa"></noscript>
  • <td id="caaaa"><option id="caaaa"></option></td>
    <td id="caaaa"></td>
  • 發布時間:2019-10-27 12:21 原文鏈接: 菌落PCR,快速鑒定重組質粒

    質粒快速鑒定   

     

    試劑

     

    Protoplasting buffer:

     

    30mM Tris-HCl, pH8.0                    0.33ml/1.0M

     

           5mM EDTA                                0.1ml/0.5M

     

           50mM NaCl                               0.1ml/5.0M

     

           20% Sucrose                              5ml/40%

     

           50 μ g/ml RNAseI                          50ul/10mg/ml

     

           50 μ g/ml lysozyme                       50ul/10mg/ml

     

    補水至10ml,-20℃分裝保存。

     

      Lysis buffer:

     

    89mM Tris-HCl, pH8.0

     

    89mM boric acid               2ml of 5×TBE

     

    2.5mM EDTA

     

    2% SDS                         2ml of  10%

     

    5% sucrose                     1.25ml of 40%

     

    0.04% bromphenol blue         4mg

     

    補水至 10ml  - 20℃分裝保存。

     

    步驟:

     

    1 .將轉化后的菌液鋪平板, 37  過夜培養

     

    2 .配制 0 .6--0 .7% 瓊脂 TBE 膠。

     

    3 .用連續加樣槍在 96 孔板中每孔加入 10 μ l Photo plasting Buffer 

     

    4 .用滅過菌的 10ul 小槍頭挑取單克隆白斑至含有 Photo plasting Buffer  96 孔板中,振蕩混勻。

     

    5 .用連續加樣槍將 Lysis Buffer 上樣于凝膠中,每孔 μ l ,用排槍將細胞與 Protoplasting buffer 混合液 上樣于凝膠中(細胞在 Protoplasting buffer 中不宜超過 30-40 min ),并點上Marker 

     

    6 .調節電壓為 20V (小槽)或 40V (大槽),電泳 15min ,使細胞充分裂解,將電壓調高到 200V ,繼續電泳 1hr ,照相。

     

    7 .根據膠圖粗略鑒定插入片段的大小及小片段率。

     

    2 .菌落 PCR

     

     

    1.取適量PCR薄壁管,置于冰上,每管先加入17.3ul的滅菌水。

     

    人体艺术视频