質粒快速鑒定
試劑：
Protoplasting buffer:
30mM Tris-HCl, pH8.0 0.33ml/1.0M
5mM EDTA 0.1ml/0.5M
50mM NaCl 0.1ml/5.0M
20% Sucrose 5ml/40%
50 μ g/ml RNAseI 50ul/10mg/ml
50 μ g/ml lysozyme 50ul/10mg/ml
補水至10ml，-20℃分裝保存。
Lysis buffer:
89mM Tris-HCl, pH8.0
89mM boric acid 2ml of 5×TBE
2.5mM EDTA
2% SDS 2ml of 10%
5% sucrose 1.25ml of 40%
0.04% bromphenol blue 4mg
補水至 10ml ， - 20℃分裝保存。
步驟：
1 ．將轉化后的菌液鋪平板， 37 ℃ 過夜培養。
2 ．配制 0 .6--0 .7% 的瓊脂糖 TBE 膠。
3 ．用連續加樣槍在 96 孔板中每孔加入 10 μ l Photo plasting Buffer 。
4 ．用滅過菌的 10ul 小槍頭挑取單克隆白斑至含有 Photo plasting Buffer 的 96 孔板中，振蕩混勻。
5 ．用連續加樣槍將 Lysis Buffer 上樣于凝膠中，每孔 4 μ l ，用排槍將細胞與 Protoplasting buffer 混合液 上樣于凝膠中（細胞在 Protoplasting buffer 中不宜超過 30-40 min ），并點上Marker 。
6 ．調節電壓為 20V （小槽）或 40V （大槽），電泳 15min ，使細胞充分裂解，將電壓調高到 200V ，繼續電泳 1hr ，照相。
7 ．根據膠圖粗略鑒定插入片段的大小及小片段率。
2 ．菌落 PCR
1．取適量PCR薄壁管，置于冰上，每管先加入17.3ul的滅菌水。