紫外-可見光譜鑒別法與紅外光譜鑒別法在藥物鑒別中應用非常廣泛。
一、紫外-可見光譜鑒別法
含有芳環或共軛雙鍵以及生色團和助色團的藥物,在紫外-可見光區有特征吸收,
可以用紫外-可見光譜法進行鑒別,常用的方法有3種。
1.對比吸收曲線的一致性 按質量標準,將供試品與對照品用規定溶劑分別配成
一定濃度的溶液,照紫外-可見分光光度法在規定波長范圍內繪制吸收曲線,供試品和對照品的圖譜應一致。所謂一致是指吸收曲線的峰位、峰形和相對強度均一致。
例如地酚軟膏的鑒別方法為:取含量測定項下的溶液,照紫外-可見分光光度法測定,供試品溶液在440～470nm波長范圍內的吸收光譜應與對照品溶液的吸收光譜
致。
2.利用吸收特征的一致性根據最大吸收波長、最小吸收波長、吸收系數、吸光度
實鑒比值等吸收特征值,又分為5種情況。
(1)利用吸收系數的一致性:按照質量標準,將供試品用規定的溶劑配成一定濃度的供試品溶液,照紫外-可見分光光度法在規定波長處測定吸光度,由吸光度及濃度根,據式計算
吸收系數,然后與質量標準中規定的吸收系數對比,如果在規定范圍內,表示供試品吸收系數符合規定,
為百分吸收系數;A為吸光度;C為供試品的濃度(g/100ml);L為吸收池厚度(cm)。
(2)利用最大吸收波長和相應吸收系數的一致性按質量標準,將供試品用規定的溶劑配成一定濃度的供試品溶液,按分光光度法在規定波長范圍內測定最大吸收波長和相應的吸光度,由濃度及測定的吸光度計算吸收系數,然后與質量標準中規定的最大吸收波長和相應的吸收系數對比。
(3)利用最大吸收波長和相應吸光度的一致性:按質量標準,將供試品用規定的溶劑配成一定濃度的供試品溶液,按分光光度法在規定波長范圍內測定最大吸收波長和相應的吸光度,然后與質量標準中規定的最大吸收波長和相應的吸光度對比,如果一致,表示該項檢查符合規定。例如,雙嘧達莫的鑒別方法為:取本品,加0.01mol/L鹽酸溶液制成每1ml中含10μg的溶液,照紫外-可見分光光度法測定,在283nm的波長處有最大吸收,吸光度約為0.62。
(4)利用最大吸收波長的一致性或最大、最小吸收波長的一致性:按照質量標準,將供試品用規定的溶劑配成一定濃度的供試品溶液,照紫外一可見分光光度法,測定最大吸收波長和最小吸收波長,然后與質量標準中規定的波長對比。
(5)利用最大最小吸收波長和相應吸光度比值的一致性:按照質量標準,將供試品用規定的溶劑配成一定濃度的供試液,照紫外-可見分光光度法在規定波長處測定最大吸收波長、最小吸收波長和相應的吸光度,然后計算最大吸收波長處吸光度與最小吸收收波長處吸光度的比值,再與質量標準中規定值對比。
3.經化學處理后,測定其反應產物的吸收光譜特征按照藥品質量標準,將供試品加入試劑進行化學處理后,再按上述任何一種方法進行鑒別。例如《中國藥典》二部關于苯妥英鈉的光譜鑒別方法為:取本品約0mg,加高錳酸鉀10mg、氫氧化鈉0.25g與水10ml,小火加熱5分鐘,放冷,取上清液5ml,加正庚烷20ml,振搖提取,靜置分層后,取正庚烷提取液,照紫外-可見分光光度法測定,在248nm的波長處有最大吸收。
二、紅外光譜鑒別法
有機藥物在紅外光區有特征吸收,藥物分子的組成、結構、官能團不同時,其紅外吸收光譜也不同,故可以作為有機藥物鑒別的依據。藥物的紅外光譜能反映藥物分子的結構特征,具有專屬性強、準確度高的特點,是驗證已知藥物的有效方法。主要用于組分單一、結構明確的原料藥,特別適合于藥物化學結構比較復雜,相互之間差異較小,用顏色反應或沉淀反應以及紫外-可見光譜法不足以區分時,采用紅外光譜法常可有效地解決。
雖然紅外光譜法的專屬性強,但繪制紅外吸收光譜時受外界條件影響較大,圖譜容發生變異。為了確保鑒別結果準確無誤,常與其他理化方法聯合進行。
用紅外光譜鑒別藥物時,《中國藥典》二部采用標準圖譜對照法,即按照藥典指定范效和的條件繪制供試品的紅外吸收光譜,然后與《藥品紅外光譜集》中的相應標準圖譜進行對比核對是否一致,如果峰位、峰形及相對強度都一致時,表示該項檢查符合規定。