花粉儲藏及花粉生命力的測定

花期不遇，給雜交工作造成困難，有的樹木和園林植物  可通過催延花期解決，有的則不得不進行花粉儲藏，營此我們必須掌握花粉儲藏的原理與技術。
    為了避免雜交工作失誤，在使用遠地寄來的花粉或經過一段時間儲藏的花粉之前，必須對花粉生命力進行鑒定，以便對雜交成果進行分析與研究。
    一.實驗目的
    掌握了鮮花粉儲藏及花粉生命力鑒定的方法及原理。
    二.實驗材料
    牡丹、鳳仙花、柳樹等植物的花粉。
    三.儀器及藥品
    載玻片、蓋玻片、解剖針、毛筆、干燥器、小指形管、標簽、標記筆、顯微鏡；
    冰箱硫酸無水氯化鈣、蔗糖、蒸餾水、硼酸（1：100000）。
    凡士林、聯苯胺、a-萘粉、酒精、碳化鈉、過氯化氫、洋菜。
    四.實驗原理
    花粉在低溫0℃—2℃、干燥、黑暗等條件下代謝遷都降低，花粉儲藏的原理就是創造代謝強度底的環境，以延長花粉有壽命。
    鑒定花粉生命力的方法很多，概括起來，不外下列四種：
    一是將待測花粉直接授粉，然后統計結實率和結子數。此法的優點是需時間較長，且實驗結果易受氣候條件的影響；
    二是將待策粉受到柱頭上，隔一定時間切下柱頭，在顯微鏡下檢查花粉的萌發情況，根據萌發率的高低來鑒定花粉的生命力；
    三是在培養基上進行花粉的人工萌發，檢查待測花粉萌發率的高低。后兩種方法都是根據花粉萌發力來反映生活力的高低。有一定參考價值，但萌發的不一定都受精，特別是人工萌發環受許多條件的限制，所以也只有相對的可靠性；
    四是用染色方法來鑒定華發安的生命力。其原理是在活的花粉內有過氧化氫酶存在。它可以促進過氧化物（如HO）放氧分解。這些剛被放出的活性氧很容易使還原劑氧化。在本實驗中所用的無色聯苯胺a—萘粉都是還原劑，但他們被氧化后卻都表現紅色或玫瑰紅色。如果花粉是活的，那麼這個反映很快，則花粉被染成紅色玫瑰紅色：如果花粉是死的，則這一反映遲遲不能進行，花粉也就保持原色。此色優點是比較快捷，但比較間接。
    五.實驗步驟：
    1、儲藏花粉：
    （1）將采來的花粉進行干燥（涼干或放入盛有氯化鈣的干燥器中初步干燥）、一般以花粉部相互黏結為度。 （2）將干燥的花粉裝在指形管中（不要太多，一般以無分之一或更少為宜）。瓶口塞以紗布，瓶外貼以標簽，注明種類、日期。
    （3）指形管放入以下不同濃度的硫酸或無水氯化鈣控制的一定濕度的干燥器中，干燥器放于 `溫度為0℃—2℃的冰箱內。
    2、花粉生命力的鑒定：
    （1）固體培養基法；
    （1）配置培養基；稱取1克洋菜，五克蔗糖（化學純），量取94毫克的蒸餾水。現把水在酒精燈商加熱煮開，到入洋菜，使之融化，然后到入蔗糖，用破棒不斷攪拌，呈透明壯即可。為保持培養的濃度，可在燒杯商用玻璃鉛筆做記號，如水分蒸發應徐徐補充，既配成5%濃度的培養基。同法配成10%、15%、20%濃度的培養基。
    （2）載平； 用玻璃棒蘸少量培養基，趁熱滴在懸鈴載玻片的凹槽，放置片刻，使其冷凝。
    （3）播種花粉： 將上述處理達到的載波片置于黑色紙上然后用解剖針粘少量花粉均勻地撒在培養基上，但不可過多，否則為以后觀察帶來困難。
    （4）觀察； 把植被好的騙子放在預先掂有濕潤吸水紙的培養器內，然后蓋上蓋、放在20—22c的溫箱中培養。牡丹的花粉接種一種小時即可統計萌發率。隨即在顯微鏡下取三個視野，計算花粉總數及發芽數。算出平均出芽率。
    （2）懸滴培養法：
    （1）配培養液： 稱取5克蔗糖（化學純）量取95m1蒸餾水，現把水放在酒精燈上加熱燒開
    然后到入蔗糖，用玻璃棒攪拌即成5%的培養基。
    （2）載植： 用蠟環（或玻璃環）和凡士林在懸滴載片的凹點上做一圍墻，蠟環（或玻璃環）上緣涂一層凡士林，并往凹點內滴一滴培養液。然后均勻地撒上少量花粉，拿號蓋玻璃片在往上提的過程中迅速將它翻轉過來（利用這個慣性保持其球面）小心地把玻片平放在蠟環（或玻璃環）上并使其周圍沒有縫隙。如此便構成了一成笛閉的小室。
    （3）觀察： 把上述制成的片子小心放到培養內（注意在所有懸滴過程中不能使懸滴流跑）然后放到溫箱中。 保持22℃-24 ℃的溫度。 牡丹花粉接種 后一小時既可觀察 。花粉發芽 檢查在 低倍鏡下進行，花粉的長度為花粉粒直徑2倍以上才算發芽， 一倍以上者算萌芽。
    （4）染色法：
    配制溶液：
    a20克聯苯胺溶于10的酒精中，盛入褐色瓶中。
    B 0.15克一萘溶于100的酒精中，盛入褐色瓶中。
    c 0.25克碳酸鈉溶于蒸餾水中，盛入白色瓶中。
    d 以上三種溶液等量混合，即成“甲液，盛如白色瓶中。
    E將3%過氧化氫，臨用前用蒸餾水稀釋成0.3%溶液，即成“乙液。
    （2制片；
    取少量花粉放到懸滴載玻片的凹點內，滴入一滴甲液，再滴一滴0.36%的H2O2，三分鐘之后觀察之。
    統計存活率； 在顯微鏡下觀察凡表現紅色或玫瑰紅色的都有生命的花粉。黃色或不著色者為沒有生命的花粉。