乙醇結晶法
粗牛羊膽酸的制備 取牛或羊膽汁，加100 g/L氫氧化鈉，加熱煮沸12-18h，得皂化液。冷卻后加酸調pH 1，析出膽酸，將膽酸取出，經水煮、漂洗、于75℃干燥、磨粉，得粗牛羊膽酸。
牛、羊膽酸[NaOH]→[100℃, 12-18h]皂化液[H2SO4]→[pH1, 75℃]粗牛、羊膽酸
牛羊膽酸成品的制備 取粗膽酸，加0.5-1倍量的95%乙醇，加熱回流至固體溶解，冷卻。取出結晶搗碎，過濾，加95%乙醇洗滌至濾液無色。結晶再加4倍量乙醇，加100-150g/L活性炭，加熱回流至結晶溶解，趁熱過濾，濾液濃縮至原體積的1/4，冷卻，結晶，過濾，加乙醇洗滌結晶，干燥，得牛羊膽酸成品。
粗牛、羊膽酸[乙醇，活性炭]→精制液[90℃以下]→牛、羊膽酸成品
乙酸乙酯分離法
粗制豬膽酸的制備取新鮮豬膽汁，在攪拌下加3-3.5倍量飽和石灰水上清液，待加完后繼續攪拌5-10min，加熱至沸2min，冷卻，過濾，濾液加鹽酸調pH3.5，析出沉淀，靜置12h以上，得粗膽酸。取出，水洗，加1.5倍氫氧化鈉，加9倍水，加熱煮沸12-18h，放冷，靜置過夜，得膏狀物。加水，加硫酸調pH=1，析出豬膽酸。取出，搗碎，漂洗至無酸性，過濾，得粗制豬膽酸。豬膽汁[飽和石灰水]→[100℃， pH11-12]堿性濾液[HCl]→[pH3.5]粗膽酸[水，NaOH]→膏狀物[H2SO4]→[pH1]粗制豬膽酸
豬膽酸成品的制備 取粗豬膽酸，加4倍量乙酸乙酯，加150-200g/L活性炭，加熱回流0.5h，放冷，過濾，濾餅加1.5-2.5倍乙酸乙酯處理1次，合并兩次濾液。加200g/L無水硫酸鈉，靜置過夜，濃縮至原體積的1/3，放出，冷卻結晶，過濾，用乙酸乙酯洗滌結晶，干燥，得豬膽酸成品。
粗制豬膽酸[乙酸乙酯，活性炭]→濾液[無水硫酸鈉]→濾液[濃縮]→豬膽酸成品。
動物提取
從家畜（豬、牛、羊、兔）的膽汁中提取。