支原體是一類沒有細胞壁，能夠自我復制的，可以通過過濾器并能夠通過人工培養增殖的原核微生物，其不能進行革蘭氏染色，但染色時會留下菌落的印記。
支原體是寄生蟲和共生體，有些可能對多種動植物宿主致病。在人類中，支原體通常是表面寄生蟲定植于呼吸道和泌尿道的上皮內壁，感染可能會持續很長時間，而不會引起明顯的細胞損傷。培養物中細胞的感染幾乎可以影響細胞代謝的每一條途徑，包括細胞表型特征的改變和正常生長。
由于支原體本身的特性，使其不易被清除，支原體污染對于生物技術產品的研究和生產是一個嚴重且普遍的問題。為了確保生物技術產品和用于生產這些產品的相關材料的安全性，支原體檢測是必要的質量控制措施。
根據美國藥典第63章節
直接培養法是根據支原體在液體培養基生長過程中，以不同的生長方式導致液體培養基的pH發生變化，從而使含有酚紅的液體培養基發生顏色變化，并根據液體培養基的傳代平板的生長情況判定檢測產品是否抑制支原體的生長。
指示細胞培養法是通過能夠與支原體核酸結合的熒光染料對指示細胞進行染色，通過指示細胞在熒光顯微鏡下觀察是否有支原體熒光判定檢測產品是否抑制支原體的生長。
直接培養法：
實驗周期為28天，在第0天，需要進行液體培養基和固體培養基接種，包括陰性對照，供試品檢測，陽性對照和干擾實驗。以空白培養基作為陰性對照，以口腔支原體和肺炎支原體作為陽性對照，分別將10 mL的陰性對照，供試品，陽性對照和供試品與支原體的混合溶液接種到100 mL的液體培養基中，支原體的接種總量不大于100 CFU，將接種后的液體培養基置于36±1 ℃的培養箱中進行培養，培養時間不超過21天，并在培養期間，2-3天觀察一次液體培養基的顏色變化。
將陰性對照，供試品，陽性對照和供試品與支原體的混合溶液接種于支原體瓊脂培養基上，支原體的接種總量不大于100 CFU，接種后將支原體瓊脂平板置于36±1 ℃，5-10% CO2，＜0.5% O2的環境中進行培養，培養14天后對支原體在顯微鏡進行計數。
在2-4天，6-8天，13-15天，19-21天對液體培養基進行傳代培養，從液體培養基中吸取0.2 mL培養物，接種在支原體瓊脂培養基上，至少接種一塊，接種后放入36±1℃，5-10%CO2，＜0.5%O2的環境中進行培養，除了19-21天的培養物培養7天外，其余傳代批次的培養物需培養14天。對于陽性對照和干擾實驗的傳代，需要先觀察上次傳代平板的結果，若上次傳代的平板有支原體生長，則無需繼續進行傳代，并結束實驗。
口腔支原體 肺炎支原體
指示細胞培養法：
實驗周期為7天，指示細胞密度需在2E4 cells/mL-2E5 cells/mL范圍內。
在第0天，進行陰性對照，供試品檢測，陽性對照和干擾實驗的接種，以空白培養基作為陰性對照，以口腔支原體和豬鼻支原體作為陽性對照。將1 mL的陰性對照，供試品，陽性對照和供試品與支原體的混合溶液接種至指示細胞，接種后置于36±1℃進行培養。
在第3天，進行指示細胞的傳代培養，將陰性對照，供試品檢測，陽性對照和干擾實驗的指示細胞接種至六孔板中；傳代后繼續培養3-5天，使用二苯甲酰胺熒光染料對指示細胞進行染色。染色后在熒光顯微鏡下對指示細胞進行觀察。根據觀察結果判定供試品是否對支原體的生長存在抑制作用。
口腔支原體 豬鼻支原體
參考文獻
<1>.United States Pharmacopoeia 63