一、實驗目的
了解和掌握熒光分光光度計的使用方法
二、實驗原理
測Vc 的實驗原理：抗壞血酸在氧化劑存在下，被氧化成脫氫抗壞血酸，氧化型的抗壞血酸與鄰苯二胺作用生成熒光化合物(脫氫抗壞血酸對－氮雜萘)，此熒光化合物的激發波長是350nm，熒光波長在430nm，其熒光強度與抗壞血酸含量成正比，樣品的熒光強度與抗壞血酸標準樣品熒光強度相比較，即可計算出樣品中抗壞血酸的含量。
測VB2的實驗原理 :維生素B2（核黃素）在468nm紫外光激發下產生熒光，在一定范圍內，其熒光強度與核黃素濃度成正比。用連二亞硫酸鈉還原成無熒光物質，通過測定樣品在加入連二亞硫酸鈉前后兩次的熒光強度差值，計算樣品中核黃素的含量 。
三、試劑與器材
熒光分光光度計、組織搗碎機、離心機、電子天平、燒杯、試紙、磷酸—冰醋酸溶液、抗壞血酸標準溶液、活性炭處理、pH4.6醋酸－醋酸鈉緩沖液、VB2標準儲備液、連二亞硫酸鈉、 0.1mol/L HCl。
四、操作方法
① Vc測定：稱樣→加偏磷酸-冰醋酸→勻漿→樣品、標樣加活性炭→過濾→處理→加鄰苯二胺→測定
② VB2測定：稱樣→加鹽酸→勻漿→樣品、標樣加醋酸-醋酸鈉緩沖液→過濾→測定→加連二亞硫酸鈉→測定
五、關鍵步驟與注意事項
1、加入的活性炭要適量；
2、鄰苯二胺鹽酸鹽溶液在空氣中顏色變暗，影響顯色，現用現配；
3、由于抗壞血酸和核黃素遇光分解，所以整個操作過程應避光；