紙層析分離過程中的平衡結束后，將濾紙點樣的一端浸入溶劑中，在溶劑液面距原線距離約1cm時開始展開，當溶劑前沿到達濾紙另一端0.5～1cm時展開結束，取出濾紙，在溶劑前沿處做一標記，晾干或用冷風吹干。展開所用溶劑必要時用離心機進行預處理。
按溶劑在濾紙上流動方向的不同，有上行展開、下行展開、環形展開和雙向展開四種方式。
1、上行展開：
將濾紙點樣的一端向下浸入溶劑中，溶劑因毛細管引力作用從下向上流動。
上行展開操作簡單，重現性好，是最常用的展開方法，但展開時間較長。
2、下行展開：
在層析缸上部有一盛展開劑的液槽，將濾紙點樣的一端向上浸入槽中，溶劑主要靠重力作用自上而下流動。
下行展開法展開速度快，但遷移率重現性較差，斑點易擴散。
3、環形展開：
將樣品點于圓形濾紙距圓心1cm左右的環形線（原線）上，濾紙水平放置，溶劑由濾紙條引向圓心，然后不斷向四周水平方向流動，展開的圖譜呈弧形。采用環形法展開時，最好使用無方向性的特制濾紙。
4、雙向展開：
如果樣品組分較多，用一種溶劑（常為酸性）不能將各組分全部分開時，可將樣品點在方形濾紙的一角，用一種溶劑展開后吹干，將濾紙轉動90度后再用另一種溶劑（常為堿性）展開。