（一）原 理
蛋白質分子中含有酪氨酸、色氨酸及苯丙氨酸等殘基，它們的結構中具有共軛雙鍵，對紫外光有吸收作用，其最大值在280nm波長處。在此波長附近，蛋白質溶液的光吸收值與其含量（范圍是0.1~1.0mg/ml）成正比，因此，280nm的吸光度可用作蛋白質的定量測定。若將已知不同濃度的蛋白質標準溶液在280nm處測定，并作標準曲線，即可求得未知溶液的蛋白質濃度。此法測定迅速，用量較少，而且不消耗樣品和試劑。但若樣品中含有其他在280nm吸收的物質，如嘌呤嘧啶等化合物時，就有干擾作用。
（二）試劑及器材
（1）標準蛋白質溶液：準確稱取經凱氏定氮法校正的結晶牛血清白蛋白，配制成濃度為1mg/ml的溶液。
（2）待測蛋白質溶液：濃度為1mg/ml左右的蛋白質溶液。
（三）操作
1. 280nm的光吸收法
（1）標準曲線的繪制：取8支試管，編號后按下表加入試劑。
|
管號 試劑(ml) |
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
| 標準蛋白質溶液 | 0 | 0.5 | 1.0 | 1.5 | 2.0 | 2.5 | 3.0 | 4.0 |
| 蒸餾水 | 4 | 3.5 | 3.0 | 2.5 | 2.0 | 1.5 | 1.0 | 0 |
| 蛋白質濃度（mg/ml） | 0 | 0.125 | 0.25 | 0.375 | 0.50 | 0.625 | 0.75 | 1.0 |
| OD280 |
混勻 ，選用光程為1cm的石英比色杯，在紫外分光光度計280nm波長處以0號管調“零”分別測定各管溶液的光密度（OD280）。以縱坐標為光密度值，橫坐標為蛋白質濃度繪出標準曲線。
（2）樣品測定：取待測蛋白質溶液1ml，加入蒸餾水3ml，混勻，按上述方法測定280nm波長處的光密度值，并從標準曲線上查出待測蛋白質的濃度。
2．280nm和260nm的吸收差法
將待測的蛋白質溶液稀釋到光密度在0.2~2.0之間，在波長280nm和260nm處以相應的溶液作空白對照，分別測得待測樣品的光密度值（OD280和OD260）。應用280nm和260nm的吸收差法經驗公式直接計算出蛋白質濃度。
公式： 蛋白質濃度（mg/ml）=1.45 OD280—0.74 OD260