Km即是當反應速度為最大反應速度一半時的底物濃度。從v—[s]矩形雙曲線上可得V，再從V/2處可求得Km值，但實際上，即使用很大的底物濃度，也只能得到趨近于V的反應速度，而達不到真正的V，因此測不到準確的Km值，為了得到準確的Km值，可以把米氏方程式加以改變，使之成為斜截式：y=kx+b的直線方程，然后用圖解法求出Km值 。
1.LineweaverBurk方程（雙倒數作圖法）
1/V=Km+[S]/Vmax[S]改寫成1/V=Km/Vmax[S]+1/Vmax
實驗時選擇不同的[S]測定相應的v，求出兩者的倒數，以1/v對1/[S]繪出工作曲線如下圖，然后利用斜率，換算出Km。
實際上，由于操作條件和操作技能所限，以及操作時準確度達不倒要求，引入誤差太大等原因，常常得不到這樣的一條理想的直線，那么它的斜率就不是一個定值，因而Km的值就不能直接由這種作圖法求出，或求出的Km值不準確。如果令1/v=0，則1/[S]的截距為-1/Km，然后根據具體的數值，換算出Km。但這需要在實驗操作的同時要進行相關的推導和計算，并且是在明確1/[S]的截距與Km關系的前提之下 。
2.Hanes作圖法
[S]/V=1/Vmax[S]+Km/Vmax
上式也是直線方程式，稱為Hanes方程式。用[S]/V對[S]作圖，所得直線的斜率為1/Vmax，[S]/V軸上的截距為Km/Vmax，而[S]軸上的截距為-Km。Hanes法的優點為數據點在坐標圖中的分布較平坦，但因[S]/V包含兩個變數，這就增大了誤差，且統計處理也復雜得多。