夫西地酸滴眼液為抗微生物類制劑，通過阻斷延伸因子G(EF-G)與核糖體和GTP(三磷酸鳥苷)的結合，中止細菌蛋白的合成過程中的能量供應，從而抑制細菌蛋白的合成。夫西地酸對多種革蘭氏陽性細菌和革蘭氏陰性球菌有效，對腸桿菌科和真菌無效。臨床應用過程中夫西地酸沒有出現與其他抗生素的一般交叉耐藥性，原因可能是因為夫西地酸的結構式與其他抗生素的不同。體外試驗表明染色體耐藥多樣株對夫西地酸有正常的敏感性，其耐藥機理可能是由于靶位(EF-G)發生了突變。不過，它們比親代菌株生長緩慢，并且致病性較低，表明菌株出現一定的缺陷性。最近在某些區域，從膿胞病患者身上首先鑒別得到了一株質粒決定型的耐藥克隆。如此在其他病人組中發現菌株的頻率還不清楚。耐藥機制是對目標結合位點的競爭性結合。
對于夫西地酸的EUCAST和CLSI敏感折點還沒有被確定，局部使用的抗生素一般沒有設定敏感折點。特別是在治療嚴重感染時，單個菌屬的獲得性耐藥的發生率可能因地域和時間的不同而不同，并且對當地的耐藥信息是必須了解的。如果必要，在當地有至少幾種感染對藥物的效用出現流行性的耐藥性，應征求專家的建議。