梅毒的病程長，癥狀復雜，可與很多其他疾病的表現相象，需要結合病史、體檢和實驗室檢查的結果，進行綜合分析，才能得出診斷。病史包括感染史，有無非婚性行為和婚外性行為；性病經過，有無硬下疳和二、三期梅毒的經過；婚姻史；分娩史和治療經過等。進行全面細致的體格檢查，包括掌跖部位、外生殖器、口腔等部位，病程長的患者主要檢查神經系統、骨、心臟等。
梅毒的實驗室檢查很重要，對疾病的診斷有重要的價值，包括梅毒螺旋體的檢查、梅毒血清試驗等，包括非螺旋體抗原試驗（USR、VDRL、RPR、TRUST）和螺旋體抗原血清試驗（TPPA、FTA-ABS、EIA等）。