方案11.1 玻璃器皿的準備和滅菌
| 實驗方法原理 | 檢査配方設計：如果配方完全，在加完血清之后可直接使用；如果配方不全（例如，缺少谷氨酰胺），則加人相應的濃縮液。 |
|---|---|
| 實驗材料 | 培養基儲存液 谷氨酰胺 血清 抗生素 青霉素 鏈霉素 |
| 試劑、試劑盒 | 吸液管 |
| 實驗步驟 | 1. 檢查培養基的配方，并決定需要添加何種添加劑，例如谷氨酰胺。 2. 將培養基放在超凈臺內，如果需要可加入其他補充物或添加劑。 3 . 如果瓶蓋用聚乙烯封口，去掉聚乙烯，用 70 % 的乙醇擦洗。 4. 將瓶子打開。 5. 將各種適量的添加劑加到瓶中，并做正確稀釋；如果配制 100 ml，按下列配方： 谷氨酰胺，200 mmol/L，1 ml 抗生素（如果需要使用），0.5 ml (每種各取) 血清，10 ml (10%) (a) 每一種添加劑均用不同的移液管。 (b)加完一種添加劑后將其移到超凈臺的一側，這樣就知道已經加了哪種添加劑。 (c)培養基配完后，將所有的添加劑和補充物從超凈臺上拿走。 6. 此方案特別針對以 Hank’s 鹽溶液配制的 MEM ，這種培養基含低濃度的碳酸氫鈉（4 mmol/L )。如果是使用以 Earle’s 鹽溶液配制的 MEM 或其他高碳酸鹽濃度的培養基（23 mmol/L ) , 配制后要充人 5% 的 CO2 氣體。不要向含有血清的培養基中直接充氣，因為培養基起泡將從瓶頸處溢出，污染的危險性增大。 7. 將瓶子蓋好。 8 . 更改標簽，記錄添加劑、日期并簽名。 9. 將培養基保存在 4°C 或直接使用。 10. 如果是第一次使用一種新的培養基，要吸出一些放在培養瓶或培養皿中，在標準條件下培養至少 1h （最好過夜），確認 pH 處于正確的水平。如果不是，調整培養基 PH ，重復上述過程，或者改變 CO2 的濃度。 |
| 注意事項 | 1. 加入培養基的補充成分（比如， 血清或抗生素）并不包含在最初的配方中。這必須在發表文章時有簡要的說明， 其他加入的添加劑（例如， 谷氨酰胺或NaHCO3是配方的一部分， 而不是補充物。它們不需要在發表文章時進行說明， 除非濃度有變化。 2. 改變溫箱的 CO2 濃度也會影響溫箱中其他的培養基。改變 CO2 的濃度應被視為一次性地調整， 不應該用于調整批間的變化，批間的變化最好通過加無菌的酸或堿來調整。 |
| 其他 | 用10X 濃縮液配制培養基是一種折中的好方法，其經濟性和便捷性介于使用以干粉配制培養基和使用1X 工作液 之間。方案11. 8 的設計可與練習10相結合。 |
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