實驗方法原理
空斑形成單位 (plaque forming units, PFUs)試驗，是將不同稀釋倍數的動物病毒與平鋪于平板表面的宿主細胞混合，當病毒顆粒在一大片宿主細胞上引發感染時，會造成細胞被溶解而形成空斑，每個空斑系由一個病毒顆粒所造成，計算空斑數目再乘以稀釋倍數，即可得知原來的病毒感染單位的濃度。
病毒空斑（又叫蝕斑）如同噬菌體的噬斑，一個空斑為一個病毒體的繁殖后代品系。在細胞培養中做空斑是一種較精確地測定病毒感染力的方法，將病毒各稀釋度種入單層細胞瓶，吸附1 h 后，在單層細胞上覆以營養瓊脂培養基，病毒在細胞中繁殖使細胞死亡。但由于瓊脂的限制只能感染鄰近的細胞，形成「空斑」的退化細胞區，經中性紅活細胞染料著色后，活細胞顯紅色，而空斑區細胞已退化不著色，形成不染色區域。凡是能在細胞培養物中產生細胞病變效應 (Cytopathic Effect, CPE) 的病毒都可采用空斑技術來測定其滴度。
實驗材料 病毒
試劑、試劑盒 臺盼藍
儀器、耗材 培養皿培養箱
實驗步驟
用含10%胎牛血清的完全培養液稀釋處于指數生長期的Sf9細胞至約5×106細胞/ml。在蝕斑試驗之前幾小時，以兩個不同的密度將細胞種于60 mm 組織培養皿中。病毒毒種貯液的每--稀釋度均設復孔，于27℃培養。
2. 如下用無血清完全培養液制成5 ml 的病毒貯液的系列稀釋液：
（1）純病毒毒種貯液：10-6、10-7、10-8稀釋
（2）轉染上清：10-4、10-5和10-6稀釋
（3）單個蝕斑：10-1、10-2和10-3稀釋
3. 用一根滅菌巴斯德吸管小心從細胞中吸去培養液。每一稀釋度的病毒均加1 ml 至各復孔中，于室溫或27℃溫育1 h，間斷搖動以保證病毒和覆蓋在細胞上的培養液均勻分布。
4. 溫育30 min 后，準備瓊脂糖頂層覆蓋物。
5. 用一根滅菌巴斯德吸管吸去病毒上清液，加入4 ml 瓊脂糖覆蓋物，讓瓊脂糖于室溫固化10~20 min 。用Parafilm 膜封住毎個平板（以防干涸），于27℃ 培養4~8天。
6. 在蝕斑形成較好而且裸眼容易看出的培養皿上，計數系列中的每一稀釋度形成的燭斑數，計算病毒滴度。
7. 如果裸眼辨別蝕斑時遇到困難，則用臺盼藍染色。準備臺盼藍覆蓋物，傾覆1 ml 至培養了3~5天、蝕斑形成較好的培養皿中。于27℃過夜溫育培養皿，讓染料擴散進入死細胞。計數藍色蝕斑的數目并確定病毒滴度