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  • 發布時間:2019-04-09 19:34 原文鏈接: 用生長譜法測定微生物的營養要求實驗

    實驗方法原理微生物的生長繁殖需要適宜的營養環境,碳源、氮源、無機鹽、微量元素、生長因子等都是微生物生長所必需,缺少其中一種,微生物便不能正常生長、繁殖。在實驗室條件下,人們常用人工配制的培養基來培養微生物,這些培養基中含有微生物生長所需的各神營養成分。如果人工配制一種缺乏某種營養物質(例如碳源)的瓊脂培養基,接人菌種混合均勻后倒平板,再將所缺乏的營養物質(各種碳源)點植于平板上,在適宜的條件下培養后,如果接種的這種微生物能夠利用某種碳源,就會在點植的該種碳源物質周圍生長繁殖,呈現出由許多小菌落組成圓形區域(菌落圈),而該微生物不能利用的碳源周圍就不會有微生物的生長,最終在平板上呈現一定的生長圖形。由于不同類型微生物利用不同營養物質的能力不同,它們在點植有不同營養物質的平板上的生長圖形就會有差別,具有不同的生長譜,故稱此法為生長譜法。該法可以定性、定量地測定微生物對各種營養物質的需求,在微生物育種、營養缺陷型鑒定以及飲食制品質量檢測等諸多方面具有重要用途。
    實驗材料

    大腸桿菌

    試劑、試劑盒

    合成培養基木糖葡萄糖半乳糖麥芽糖蔗糖乳糖無菌生理鹽水

    儀器、耗材

    無菌平皿無菌牙簽吸管

    實驗步驟

    1. 將培養 24 h 的大腸桿菌斜面用無菌生理鹽水洗下,制成菌懸液。


    2. 將合成培養基溶化并冷卻至 50℃ 左右,加入上述菌懸液并混勻,倒平板,


    3. 在兩個已凝固的平板皿底用記號筆分別劃分成三個區域,并標明要點植的各種糖,如圖所示。


    生長譜法測定大腸桿菌碳源要求示意圖


    4. 用 6 根無菌牙簽分別挑取 6 種糖對號點植。


    5. 待糖粒溶化后再將平板倒置于 37℃ 溫室保溫18~24 h ,觀察各種糖周圍有無菌落圈。

    展開 
    注意事項

    1. 點植時糖要集中,取糖量為小米粒大小即可,糖過多時,溶化后糖溶液擴散區域過大會導致不網的糖相互混合。


    2. 點植糖后不要匆忙將平板倒置,否則尚未溶化的糖粒會掉到皿蓋上。


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