(1)供體淋巴細胞的制備
新鮮外周靜脈血按1∶1比例加在裝有比重為1.077的淋巴細胞分離液的離心管中,輕穩加在液面上 2000 r/min離心20 min,吸取中間霧狀淋巴細胞層,生理鹽水洗滌2次,臺盼藍染色,計數板計數。調整細胞密度為2×10^9/L,分成3管,各自離心,留取沉淀。 每管中加入250 μL絲裂霉素(終濃度50 mg/L)和1.75 mL生理鹽水,37℃水浴40 min, 生理鹽水離心洗滌2次。用含100 mL/L胎牛血清的RPMI 1640液調整細胞密度為1×1010/L。加入抗體封閉抗原,標記為D。
(2)受體淋巴細胞的制備
新鮮外周靜脈血按1∶1比例加在裝有比重為1.077的淋巴細胞分離液的離心管中,輕穩加在液面上, 2000 r/min離心20 min,吸取中間霧狀淋巴細胞層, 生理鹽水洗滌2次, 用含120 mL/L胎牛血清的RPMI 1640培養液調整細胞密度為1×1010/L, 標記為R。
(3)混合淋巴細胞培養
將已制備好的R和D按如下分組加入96孔板,置37℃,50 mL/L CO2孵箱中培養24 h。 A組:R 50 μL+D 50 μL;B組:R 50 μL+D 50 μL+IL?2純化中和mAb 15 μL;C組:R 50 μL+IL?2純化中和mAb 15 μL;D組:R 50 μL。 每組3個復孔,空白對照組為RPMI 1640培養液100 μL。