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  • 發布時間:2019-04-28 18:05 原文鏈接: 水稻根尖染色體標本制備

    1.取材: 選取水稻種子,充分浸種后,將它們擺在鋪有濾紙的培養皿內,在約28℃條件下發芽培養,當胚根長至1~1.5cm時,剪下備用。
    2.預處理 
    壓片法:采用0.1%秋水仙素處理2h左右
    去壁低滲法可采用以下四種方法處理
    處理方法 0.002mol/L8-羥基喹啉 α-溴萘飽和溶液 低溫(-4℃) 卡諾氏Ⅰ固定液
    處理時間(h)                 1                   24               24             24 
    注:卡諾氏Ⅰ固定液 乙醇:冰醋酸(3:1)
    3.固定 卡諾氏Ⅰ固定液,固定時間以不超過24h為宜。
    經過固定的材料如不及時使用,可經90%酒精換到70%酒精各半小時,再換入一次70%酒精,在0~4℃冰箱內備用。
    去壁低滲法
    a.將3固定的材料用DDW洗凈后,0.075mol/LKCL溶液室溫條件下處理約30min。
    b.酶解去壁 吸取低滲液,加入1%混合酶液(1%果膠酶與1%纖維素酶的混合液,均為Sigma公司),28℃左右,酶解4.5~5h.酶解過程中,將材料瓶輕輕搖動1~3次,使材料與酶液充分接觸。
    c.后低滲 吸取酶液,用DDW沖洗材料2~3次,然后在DDW中停留30min。
    d.重固定 吸取低滲液后,加入新配制的卡諾氏Ⅰ固定液,固定時間約20min。
    e.標本制備 吸取固定液后,將根尖搗碎,再滴入新鮮固定液3~5滴,制成細胞懸液,充分攪勻。吸出細胞懸液滴于清潔載玻片上。(為了使細胞懸液能充分散開,載玻片可預先放置于-20℃冰箱內保存,使用時取出)再將載玻片于酒精燈下來回移動,烤片。
    f.染色 改良品紅[11]染色30~50min。染色完畢,洗去染液,脫水透明,干燥后鏡檢。
    根尖壓片法
    解離: 將1.3固定好的材料用DDW沖洗2~3次,放入盛有1N鹽酸(濃鹽酸:DDW 1:11)的小瓶中,在60℃左右水浴鍋中處理15min。解離完畢時,根尖分生區是乳白色,而根冠和伸長區則顯透明。
    染色: 將材料水洗3~5次,注意,一定要將解離液沖洗干凈,否則材料不易著色。改良品紅染色約5h。
    壓片: 取染色完畢的根尖置于干凈載玻片上,切除根冠,切下根尖分生區,加入一滴清水,蓋上玻片后壓片。鏡檢,如果染色過深,可滴加一滴45%醋酸溶液分色。
     

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