實驗概要

        水稻根尖染色體標本制備

實驗步驟

1.取材： 選取水稻種子，充分浸種后，將它們擺在鋪有濾紙的培養皿內，在約28℃條件下發芽培養，當胚根長至1～1.5cm時，剪下備用。
2.預處理 
    壓片法：采用0.1％秋水仙素處理2h左右
    去壁低滲法可采用以下四種方法處理       
                                   處理方法             0.002mol/L8-羥基喹啉       α－溴萘飽和溶液            低溫（－4℃）            卡諾氏Ⅰ固定液
                                   處理時間（h）                 1                                          24                                24                                        24 
                                                          注：卡諾氏Ⅰ固定液 乙醇：冰醋酸（3：1）
3.固定 卡諾氏Ⅰ固定液，固定時間以不超過24h為宜。
    經過固定的材料如不及時使用，可經90％酒精換到70％酒精各半小時，再換入一次70％酒精，在0～4℃冰箱內備用。

去壁低滲法
a.將3固定的材料用DDW洗凈后，0.075mol/LKCL溶液室溫條件下處理約30min。
b.酶解去壁 吸取低滲液，加入1％混合酶液（1％果膠酶與1％纖維素酶的混合液，均為Sigma公司），28℃左右，酶解4.5～5h.酶解過程中，將材  
    料瓶輕輕搖動1～3次，使材料與酶液充分接觸。
c.后低滲 吸取酶液,用DDW沖洗材料2～3次，然后在DDW中停留30min。
d.重固定 吸取低滲液后,加入新配制的卡諾氏Ⅰ固定液，固定時間約20min。
e.標本制備 吸取固定液后，將根尖搗碎,再滴入新鮮固定液3～5滴，制成細胞懸液，充分攪勻。吸出細胞懸液滴于清潔載玻片上。（為了使細胞懸
    液能充分散開，載玻片可預先放置于－20℃冰箱內保存，使用時取出）再將載玻片于酒精燈下來回移動，烤片。
f.染色 改良品紅［11］染色30～50min。染色完畢，洗去染液，脫水透明，干燥后鏡檢。

根尖壓片法
a:解離: 將1.3固定好的材料用DDW沖洗2～3次，放入盛有1N鹽酸（濃鹽酸：DDW 1：11）的小瓶中，在60℃左右水浴鍋中處理15min。解離完畢
    時,根尖分生區是乳白色,而根冠和伸長區則顯透明。
b:染色: 將材料水洗3～5次，注意，一定要將解離液沖洗干凈，否則材料不易著色。改良品紅染色約5h。
c:壓片: 取染色完畢的根尖置于干凈載玻片上，切除根冠，切下根尖分生區，加入一滴清水，蓋上玻片后壓片。鏡檢，如果染色過深，可滴加一滴
    45％醋酸溶液分色。