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  • 發布時間:2020-07-13 19:38 原文鏈接: 正常小梁細胞原代培養

    實驗材料:

    1.    材料來源:人眼、兔眼或者豬眼等;

    2.    清洗液:不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加100IU/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素,pH7.2;

    3.    器械:小梁剪與無齒鑷等;

    4.    消毒液:200IU/ml的慶大霉素生理鹽水;

    5.    培養液:基礎液由DMEM培養基加入HEPES 6.0g/L、NaHCO32.2 g/L以及L-谷氨酰胺0.06 g/L配制而成。應用液是在基礎液內補加15%的胎牛血清、青霉素100IU/ml、鏈霉素100μg/ml,并用5% NaHCO3調節pH至7.0—7.2;

    6.    培養器皿:培養瓶、24孔培養板或培養皿若干;

     

    實驗方法:

    1.    將離體的供體眼球用200IU/ml的慶大霉素溶液浸泡消毒5min;

    2.    無菌條件下,沿角膜緣后5mm處環形剪開眼球,剪斷晶狀體懸韌帶,去除晶狀體和玻璃體;

    3.    將眼前段倒放在培養皿中,在顯微鏡下用無齒鑷把虹膜抹離角膜內皮面,暴露房角結構。用角膜剪緊貼虹膜與鞏膜的附著部位,剪除色素膜;

    4.    以PBS溶液或平衡鹽溶液輕微沖洗小梁組織表面。用小梁剪伸入Schlemm管,楔形剪取小梁組織。前界至Schwalbe線,后界至鞏膜嵴。環形取出一塊小梁組織,置于培養皿中;

    5.    經PBS漂洗后將小梁組織剪碎,幾乎成漿狀;

    6.    用無齒鑷挑起少許小梁組織,接種于24孔培養板后培養瓶皿中,輕輕鋪平。待組織稍干后加入適量培養液,在CO2培養箱靜置培養。第四天后開始換液,每周2次


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