梯度PCR儀選購建議

1971年Kleppe等人在Journal of molecular biology上發表文章首次準確、精煉、客觀的闡述了PCR方法，1976年一種從嗜熱水生菌(Thermus aquaticus)分離得到的熱穩定的DNA聚合酶的應用大大增加了PCR的效率。而現今所發展出來的PCR則是源于由Saiki和Mullis等人于1988年發表在Science上的一篇論文，PCR技術是支撐現代分子生物學發展的一塊重要基石，這種技術的廣泛應用催生了一個龐大的市場。

PCR技術是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術，它可看作是生物體外的特殊DNA復制，目前市場上常見的有：普通PCR儀、梯度PCR儀、原位PCR儀、熒光定量PCR儀（qPCR）以及數字PCR儀（dPCR）等。而使用最多是梯度PCR儀和熒光定量PCR儀，生產PCR儀廠家也是不勝枚舉，用戶認可度最高的有ABI、Roch、Biorad、HealForce等。

筆者將就如何選購一臺合適的梯度PCR儀作以下介紹，供大家參考。

2.1 精準的溫度控制系統

對PCR儀來說，溫度控制指標主要是指溫度的準確性、均一性、以及升降溫速度。

溫度的準確性：是指樣品孔溫度與設定溫度的一致性，它直接關系到實驗的成敗。由于PCR是一個幾何級數擴增的過程，不論是變性、退火還是延伸都需要準確控制溫度，對退火溫度而言溫控顯的尤為重要，有時1°甚至0.5°的差異也能決定實驗的成功與失敗，所謂差之毫厘，謬之千里。因而對PCR擴增儀而言溫度控制就意味著質量。eg：HealForce B960的溫度精確性嚴格控制在≤0.1℃。（國內大部分廠家僅要求≤0.2℃）

溫度的均一性：是指樣品孔間的溫度差異，它關系到在不同樣品孔進行反應結果的一致性。有用戶發現用同樣的樣品，同樣的PCR反應程序，最后的結果竟然差異非常明顯，或許就是因為不同位置的溫度不均勻所致。同時位置邊緣效應對PCR實驗可重復性影響非常明顯。eg：HealForce  K960的溫度均一性嚴格控制在單列≤0.2℃

升降溫速率：更快的升降溫速度，可以縮短反應進行的時間，而且縮短了可能的非特異性結合、反應的時間，能提高PCR反應的特異性。eg:HealForce T960 PCR儀標配升降溫速度高達5℃的鍍金模塊，是國內同類廠家中唯一配置鍍金模塊的。

2.2  儀器的功能性和人性化設計

越友好的操作界面、完善的功能以及人性化的設計更能吸引用戶。（熱蓋、樣品座、軟件）

熱蓋：現在的PCR儀一般均配備熱蓋，熱蓋溫度設為105℃，使樣品管頂部的溫度達到105℃左右，蒸發的反應液就不會產生凝集在管蓋上而改變反應體積，這樣用戶就無需再向反應管內加石蠟油，直接減少后繼反應的麻煩。HealForce熱蓋溫度范圍為：20-110℃。

樣品座：PCR反應多在0.2或者0.5的管子中進行，多數PCR儀也配備了不同的可更換樣品槽適配不同的樣品管。HealForce PCR儀一個槽內帶有0.2和0.5兩種不同樣品孔，不需更換基座就可以分別使用兩種不同的反應管，或者96孔板，避免了換基座的麻煩。

軟件：新的PCR儀都比較注重程序編寫的簡易性。大屏幕，顯示實時信息，倒計時，記憶存儲多個程序、自動斷電保護等都有助于實驗室中的復雜環境使用。HealForce T960和B960 PCR儀基于Windows操作系統，配備了PC端軟件，可以實現智能化操控。

ce熱蓋溫度范圍為：20-110℃。

隨著生物技術的發展，PCR儀已經發展為實驗室通用儀器，因此生產廠家也是如雨后春筍般層出不窮，光是比較參數，就夠累了。況且PCR儀還是實驗室中的老黃牛，幾乎24小時運轉，買臺可靠的儀器尤為重要。