慢病毒包裝的原理

病毒包裝的原理，就是有遺傳物質有外殼蛋白，在細胞內可以指導二者包成病毒。腺病毒擴增，也只能在293A里擴增，其他的細胞不行.慢病毒載體多是由HIV改造的，野生型的慢病毒載體是可以復制的，但是用于實驗室就只能通過改造使其變為復制缺陷型的。簡單來說，就是把相應的涉及相應功能的元件進行替換或者刪除。慢病毒包裝系統簡介及應用

一、慢病毒包裝簡介及其用途

慢病毒（ Lentivirus ）載體是以 HIV-1 （人類免疫缺陷 I 型病毒）為基礎發展起來的基因治療載體。區別一般的逆轉錄病毒載體，它對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力。慢病毒載體的研究發展得很快，研究的也非常深入。該載體可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上，從而達到持久性表達。在感染能力方面可有效地感染神經元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、內皮細胞、干細胞等多種類型的細胞，從而達到良好的的基因治療效果，在美國已經開展了臨床研究，效果非常理想，因此具有廣闊的應用前景。

目前慢病毒也被廣泛地應用于表達 RNAi 的研究中。由于有些類型細胞脂質體轉染效果差，轉移到細胞內的 siRNA 半衰期短，體外合成 siRNA 對基因表達的抑制作用通常是短暫的，因而使其應用受到較大的限制。采用事先在體外構建能夠表達 siRNA 的載體，然后轉移到細胞內轉錄 siRNA 的策略，不但使脂質體有效轉染的細胞種類增加，而且對基因表達抑制效果也不遜色于體外合成 siRNA ，在長期穩定表達載體的細胞中，甚至可以發揮長期阻斷基因表達的作用。在所構建的 siRNA 表達載體中，是由 RNA 聚合酶Ⅲ啟動子來指導 RNA 合成的，這是因為 RNA 聚合酶Ⅲ有明確的起始和終止序列，而且合成的 RNA 不會帶 poly A 尾。當 RNA 聚合酶Ⅲ遇到連續 4 個或 5 個 T 時，它指導的轉錄就會停止，在轉錄產物 3' 端形成 1~4 個U 。 U6 和 H1 RNA 啟動子是兩種 RNA 聚合酶Ⅲ依賴的啟動子，其特點是啟動子自身元素均位于轉錄區的上游，適合于表達～ 21ntRNA 和～ 50ntRNA 莖環結構（ stem loop ）。在 siRNA 表達載體中，構成 siRNA 的正義與反義鏈，可由各自的啟動子分別轉錄，然后兩條鏈互補結合形成 siRNA ；也可由載體直接表達小發卡狀 RNA(small hairpin RNA, shRNA)，載體包含位于 RNA 聚合酶Ⅲ啟動子和 4 ～ 5 T轉錄終止位點之間的莖環結構序列，轉錄后即可折疊成具有 1~4 個 U 3 ' 突出端的莖環結構，在細胞內進一步加工成 siRNA 。構建載體前通常要通過合成 siRNA 的方法，尋找高效的 siRNA ，然后從中挑選符合載體要求的序列，將其引入 siRNA 表達載體