10種鄰苯二甲酸酯類物質在l~800 mg/L范圍內線性關系良好,檢出限在0.5~1 mg/L之同,相對標準偏差在O.36%~2.35%之間。相對于常規分析方法,分析時間和有機溶劑用量均減少2/3。該方法可在常規液相色譜儀上實現,具有較強的實用性和可操作性。
相關標準
試劑
10種鄰苯二甲酸酯類化合物包括鄰苯二甲酸二甲酯(DMP)、鄰苯二甲酸二乙酯(DEP)、鄰苯二甲酸二正丙酯(DPP)、鄰苯二甲酸二正丁酯(DBP)、鄰苯二甲酸二正戊酯(DAP)、鄰苯二甲酸二正己酯(DHP)、鄰苯二甲酸丁基芐酯(BBP)、鄰苯二甲酸二環己酯(DcHP)、鄰苯二甲酸二正辛酯(DOP)和鄰苯二甲酸二異辛酯(DEHP),德國Dr.Ehren—storfer公司;甲醇(色譜純),美國Tedia公司;超純水,美國Milli—Q。
實驗方法
校準曲線的制備
混合標準儲備溶液(p=1 000 mg/L):分別稱取10種鄰苯二甲酸酯類化合物標準品0.05 g(精確到O.1 mg),用甲醇溶解,移人50 mL容量瓶中,定容,搖勻,配成質量濃度為1 000 mg/L的混合標準溶液。
移取鄰苯二甲酸酯類化合物標準儲備溶液0、1.OO、2.00、4.OO、6.00、8.00 mL于10 mL具塞刻度管中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻。此時溶液中各組分濃度分別為O、100、200、400、600和800 mg/L。在設定色譜條件下,分別取5“L進行HPLC分析。根據標準系列質量濃度和峰面積,繪制校準曲線。
樣品處理
稱取樣品約1g(精確至1mg)于10 mL具塞刻度管中,加入甲醇至刻度,振搖,超聲提取20 min,必要時高速離心。經0.45um濾膜過濾,濾液作為待測樣液備用。
測定
按前述色譜條件操作,以保留時間定性,外標法定量。若樣品中待測組分含量過高,應用甲醇稀釋后測定。色譜圖檢出的物質,經與該物質的標準紫外光譜圖比較確證后,根據峰面積,從校準曲線上查得相應組分的質量濃度。
色譜條件的選擇
以常規液相色譜柱(TC-C18(2),5um,4.6 mm×250 mm,安捷倫)為分析柱。以甲醇-水為流動相,按照國家食品藥品監督管理局提供的《化妝品中鄰苯二甲酸酯類化合物的檢測方法》中的梯度洗脫條件,進樣分析,結果如圖1所示。整個分析過程需要30 min(25 min的色譜分離時間加5 min的色譜柱平衡時間),與文獻報道基本一致。采用快速分析色譜柱,整個分析過程縮短為9 min(7 min的色譜分離時間加2 min的色譜柱平衡時間)(見圖2),分析時間縮短了2/3,大大提高了工作效率,同時節省了有機溶劑。
方法的可操作性討論
常規液相色譜儀是基層實驗室普及率較高的一類分析儀器,常規的液相分析方法需要的分析時間比較長(一般在30 min左右),有機溶劑消耗量也較大。采用亞2肛m顆粒填料的超高壓液相色譜方法具有色譜柱效高、分析速度快等優點,同時也大大降低了溶劑消耗量。然而采用小粒徑填料的色譜柱反壓很高,需要提供足夠的柱前壓,超出常規液相色譜儀的承受范圍(一般不超過20 MPa),從而影響了快速分析檢測的實現。
裝填具有核殼結構的表面多孔顆粒填料的色譜柱,具有低反壓和高柱效的特點,可以在常規液相色譜儀上實現快速分析檢測。文獻報道采用超高效液相色譜法分析四種鄰苯二甲酸酯,分析時間為3 min,但需要專門的超高效液相色譜儀器。使用常規液相色譜柱(圖1),在整個分析過程中柱前壓在12~24 MPa之間變化(流動相中有機溶劑含量的變化導致流動相黏度改變,進而導致柱前壓隨之變化);而采用快速分析柱(圖2)的柱前壓在10~18 MPa之間變化(此條件下流動相中有機含量較高,在一定程度上降低了流動相的黏度),常規液相色譜一般均可提供20 MPa的柱前壓,因此該方法具有較強的可操作性,易于在基層實驗室普及的常規液相色譜儀上實現快速分析檢測。
儀器
1200高效液相色譜儀(配備四元梯度泵、自動進樣器、柱溫箱和二極管陣列檢測器),安捷倫公司;常規液相色譜柱TC-C18(2)(5um,4.6 mm× 250mm).安捷倫公司;快速分析柱Poroshell 120EC-C18(2.7um,4.6 mm×75 mm),安捷倫公司;超聲波清洗器;高速離心機。
色譜條件
柱溫:30℃;流速:1 mL/min;流動相A:水;流動相B:甲醇;梯度洗脫,洗脫程序為:常規分析方法,[0—12- 15—22—23—25]min,[75—75—100一100一75—75]%B(體積分數);快速分析方法,[0—2—4—6—7—8]min,[82—82—100一100一82—82]%B(體積分數);紫外檢測波長:80 nm;進樣體積:5uL。