微生物稀釋平板計數、劃線分離

一、目的要求

1. 學習平板菌落計數的基本原理和方法。

2. 熟練掌握倒平板技術、系列稀釋原理及操作方法，平板涂布及劃線分離方法。

二、基本原理

平板菌落計數法是根據微生物  在固體培養基上所形成的一個菌落是由一個單細胞繁殖而成的現象進行的，也就是說一個菌落即代表一個單細胞。計數時，先將待測樣品作一系列稀釋，再取一定量的稀釋菌液接種到培養皿中，使其均勻分布于平皿中的培養基內，經培養后，由單個細胞生長繁殖形成菌落，統計菌落數目，即可換算出樣品中的含菌數。

這種計數法的優點是能測出樣品中的活菌數。此法常用于某些成品檢定（如殺蟲菌劑），生物制品檢定以及食品、水源的污染程度的檢定等。但平板菌落計數法的手續較繁，而且測定值常受各種因素的影響。

三、器材

大腸桿菌  懸液，牛肉膏蛋白胨培養基， 1ml無菌吸管，無菌平皿，盛有4． 5 ml無菌水的試管，試管架和記號筆等。

四、操作步驟

（一）稀釋平板計數

1．編號：

取無菌平皿 9套，分別用記號筆標明10-4、10-5、10-6各3套。另取6支盛有4．5ml無菌水的試管，排列于試管架上，依次標明10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。

2．稀釋

用1ml無菌吸管精確地吸取0．5ml大腸桿菌懸液放入10-1的試管中，注意吸管尖端不要碰到液面，以免吹出時，管內液體外溢。然后仍用此吸管將管內懸液來回吸吹三次，吸時伸入管底，吹時離開水面，使其混合均勻。另取一支吸管自10-1試管吸0．5ml放入10-2試管中，吸吹三次，……其余依次類推。

3．取樣

用3支1ml無菌吸管分別精確地吸取10-4、10-5、10-6的稀釋菌液0．2ml，對號放入編好號的無菌培養皿中。

4．倒平板

于上述盛有不同稀釋度菌液的培養皿中，倒入溶化后冷卻至45℃左右的肉膏蛋白胨瓊脂  培養基約10—15ml，置水平位置，迅速旋動混勻，待凝固后，倒置于37℃溫室中培養。