當外泌體遇上環狀RNA（五）

（6）circSHKBP1直接HSP90相互作用并抑 制其降解
在HGC27細胞中用circSHKBP1探針的RNA pull-down和蛋白質譜結果顯示兩個差異表達蛋白HSP90β和HSP90α（HSP90的異構體）在過表達circSHKBP1的GC細胞中富集。RIP實驗顯示，circSHKBP1能直接作用于HSP90。使用qPCR和ELISA分別檢測HSP90的mRNA和蛋白水平，結果顯示GC腫 瘤組織中的HSP90 mRNA和蛋白均上調且HSP90蛋白表達與circSHKBP1表達呈正相關。然而，在過表達circSHKBP1中使用CHX抑 制蛋白，HSP90的降解受到明顯抑 制。由于泛素連接酶STUB1可以泛素化HSP90。使用蛋白酶體抑 制劑MG132處理時HSP90的降解速度減慢。結合上述研究，作者認為circSHKBP1和STUB1競爭性結合HSP90，通過IP分析獲得證實。此外，HSP90的抑 制劑NMS-E973在體外削弱了circSHKBP1的促ai作用。這些結果表明，circSHKBP1可以直接與HSP90結合，并抑 制STUB1對HSP90的泛素化，從而促進GC的發展。

（7）circSHKBP1調節體內GC的生成
作者構建了circSHKBP1沉默株系（LV3-sh1、LV3-sh2）和超表達株系（LV5-circSHKBP1），將相應細胞接種到小鼠體內，發現源自LV3-sh1細胞的腫 瘤明顯小于源自LV3-NC的，表明敲低circSHKBP1會抑 制腫 瘤生長。另外，將轉導LV5-circSHKBP1和LV5-NC的細胞接種到裸鼠體內，并對每組中一半數量的小鼠每周給予兩次VEGF抗體。發現源自LV5-circSHKBP1細胞的腫 瘤比源自LV5-NC細胞的腫 瘤更大且更重。此外，qPCR 鑒定血清外泌體和腫 瘤的circSHKBP1的表達，發現外泌體circSHKBP1依賴于ai組織circSHKBP1的表達，這證實了circSHKBP1可通過外泌體遞送到其他部位，并可在循環系統中檢測，這使其可能成為一種很有潛力的GC分子標志物。

（8）circSHKBP1調控體內GC的轉移
為了探索circSHKBP1對體內胃ai轉移的影響，作者將熒光素轉染到上述5個細胞系，然后注入裸鼠體內。LV5-circSHKBP1和LV5-NC組中的一半的小鼠每周接受兩次VEGF抗體處理。結果表明，敲低circSHKBP1可顯 著減少肺轉移灶的數目和大小且ISH顯示，敲低circSHKBP1會導致GC肺轉移灶中的HUR和VEGF染色明顯減少。而過表達circSHKBP1可以加重肺轉移病變和增加HUR和VEGF染色。而VEGF抗體可以抑 制circSHKBP1誘導的ai細胞轉移。