光敏生物素標記(photobiotin labeling)是Forster(1985)等報道的核酸探針制備方法。光敏生物素是一種可用光照活化的生物素衍生物,它的乙酸鹽很容易溶于水,在水溶液中將光敏生物素乙酸鹽與需要標記的核酸混合,用強的可見光照射,就可將生物素標記在單鏈或雙鏈的 DNA 或 RNA 上,形成穩定的共價結合。大約每100～150個殘基結合一個生物素,這種程度的標記不會影響雜交。目前有許多跨國公司如美國的Sigma、西德的 Serva、澳大利亞的 Bresatec 等均有商品化光敏生物素,以及其標記探針試劑盒供應。我國馬立等人也研制出了光敏生物素,并首次合成了帶臂的光敏生物素,提高了檢測靈敏度。與其他方法相比,用光敏生物素標記核酸,具有以下優點:
(1)方法簡便易行、快速可靠、易于重復,不需特殊試劑,只需在水溶液中直接光照標記,因光照需要一定強度,馬立等人已成功試制出光敏生物素光照標記用燈。
(2)適用面廣,單鏈、雙鏈 DNA 或 RNA 均可標記。
(3)標記核酸的量可從1μg 至數毫克。標記核酸量較大時,標記后探針呈橘紅色,便于觀察。
(4)探針穩定性好,20℃貯存至少可達12個月不變。
(5)標記后的探針只需用簡單的乙醇沉淀法回收。
(6)標記物的檢測靈敏度可達到1～5pg DNA。
(7)沒有放射性污染問題,所以光敏生物素標記制備探針是具有很強生命力的標記方法。