尿液中兒茶酚胺和變腎上腺素進行快速、同步分析

臨床研究者通常都很關注高濃度尿液中的兒茶酚胺及其O-甲基化代謝產物(變腎上腺素)的測定。但是，這些化合物(尤其是上腺素、腎上腺素和多巴胺）由于極性較大，利用反相LC-MS/MS對其進行分析是一項巨大挑戰。因此，許多研究實驗室仍采用離子對試劑與電化學檢測(ECD)分析這類物質。雖然反相LC-MS/MS已得到成功應用，但由于尿液基質組分發生離子抑制、保留作用不足和異丙腎上腺素與腎上腺素未完全分離，致使挑戰仍然存在。
 
親水作用色譜(HILIC)已逐漸成為分析極性化合物的首選。通過對之前發表的方法進行擴展，本應用紀要介紹了尿液中單胺神經遞質與兒茶酚胺的提取與分析方法。采用沃特世(Waters^?) ACQUITY UPLC BEH Amide色譜柱可實現基于HILIC的色譜分離。Waters Oasis WCX 96孔板可用來提取尿液中的這些化合物。將復合模式弱陽離子交換固相萃取(SPE)板，與用于HILIC色譜和Waters Xevo TQD質譜的色譜柱結合使用，可獲得具有出色線性、準確度和精密度的快速、穩定方法，并且能最大限度減少基質效應。
 
用含有0.1%抗壞血酸的甲醇配制多巴胺(DA)、去甲腎上腺素(NE)、腎上腺素(EP)、3-甲氧酪胺(3-MT)、變腎上腺素(MTN)和異丙腎上腺素(NMT)的標準品混合儲液(10 μg/mL)，以防止氧化。混標儲液由10 μg/mL D3-變腎上腺素、D3-異丙腎上腺素、D4-多巴胺、D6-腎上腺素和D6-去甲腎上腺素組成，也使用含有0.1%抗壞血酸的甲醇配制。濃度為800 ng/mL的內標工作溶液應使用含有0.1%甲酸的5%甲醇當天配制。