結合反應
步驟1.將75%的結合緩沖液A與25%的結合緩沖液B混合,制備結合緩沖液;
步驟2.將結合試劑以1:600倍稀釋成結合緩沖液,得到結合反應液;
步驟3.移出60ul結合反應液到每個檢測孔和校正標準孔中(包括背景孔樣本)
步驟4.室溫避光孵育1小時
在SoftMax Pro軟件上設置模板,并在SpectraMax M5多功能微孔板讀板機上進行讀數
Note:FAM和TAMRA標記底物的IMAP熒光偏正實驗的模板在SoftMax Pro 5 軟件上已預設好,詳見Binding Assays模板文件夾。
步驟1.打開SoftMax Pro軟件上針對熒光素使用的IMAP 熒光偏振模板。FAM和TAMRA模板已預設好;如果使用的不是FAM和TAMRA熒光素,只需調整波長設置即可。對于SpectraMax M5多功能微孔板讀板機上的參數設置(見圖表2)。
步驟2.設置一個試驗模板,選定背景樣品本孔、激酶樣品本孔、校正標準品孔。激酶試驗樣品和校正標準品可分到SoftMax
Pro軟件模板上預設好的8個樣本組中。在計算最小偏振值(mP)之前,首先將只含有緩沖液的質控品分到相應的背景組中后,使用軟件自動扣除其背景熒光值。
步驟3.把微孔板放到讀板機里后---確保紫色托架(適配器)放置在微孔板托架上---然后點擊Read讀板。