一、配制用水
培養基的大部分是水,所以水的質量直接影響培養基的質量。按Waymouth標準,水的電阻應為200萬歐姆,一般實驗室里以玻璃蒸餾器制備的
雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件。
二、培養基
培養基有天然、人工兩種。一般實驗室使用的是RPMI-1640粉末培養基,以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)調pH至7.2-7.4,若pH值超過7.6或遠低于6.8,則大多數細胞不能生長。RPMI-1640不耐高壓滅菌,使用前需經滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過處理。
三、血清
培養中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高壓滅菌,無菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補體,置4℃冰箱存放待用。配制時含量視培養細胞種類、時間而定,一般用10—15%。由于血清成分復雜、條件不易控制,可選用無血清培養基。
四、抗菌素
為防止培養時期細菌的污染,可在培養基中添加適當抗菌素,一般用量與組織細胞培養相同:卡那霉素100單位/毫升,或雙抗--青霉素100單位/毫升,鏈霉素100微克/毫升。
五、植物血凝素(PHA)
非增殖期的細胞不能制備染色體,如人外周血淋巴細胞,但在離體培養過程中,在PHA的作用下,可被刺激轉化為淋巴母細胞而進入有絲分裂。
經實驗測定其分裂高峰分別于培養后44-48小時和68-72小時。
PHA有粘多糖,蛋白質兩種重要成分。粘多糖促使有絲分裂,蛋白質起凝集作用。PHA激活的細胞數隨其濃度而增加,直至全部免疫活性細胞均
被激活為止,但PHA濃度過高會引起凝集,一般采用4%濃度為好。
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