4.過濾
趁熱用濾紙或多層紗布過濾，以利于某些實驗結果的觀察.一般無特殊要求情況下，這一步是可以省去的；
5.分裝
按實驗要求，可將配制的培養基分裝入試管內或者三角燒瓶內:
(1)液體分裝分裝高度以試管高度的1/4左右為宜。分裝三角瓶的量則根據需要而定，一般以不超過三角瓶容積的一半為宜。
（2）固體分裝分裝試管，其裝量不超過管高的1/5，滅菌后制斜面。分裝三角瓶的量以三角瓶容積的一半為宜。
（3）半固體試管一般以試管高度的1/3左右為宜，滅菌后垂直待凝。
6. 加塞
培養基分裝完畢后，在試管口或三角燒瓶上塞上棉塞，以阻止外界微生物進入培養基內而造成污染，并保證有良好的通氣性能；
7.包扎
加塞后，將全部試管用麻繩捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞，其外再用一道麻繩扎好.用記號筆注明培養基名稱 ，組別，配制日期.三角燒瓶加塞后，外包牛皮紙，用麻繩以活結形式扎好，使用容易解開，同樣用記號筆注明培養基名稱，組別，配制日期；
8.滅菌
將將內層鍋取出，再向外層鍋內加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜，放回內層鍋，并裝入培養基，加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內層鍋的排氣槽內，加熱，0.103MPa，121°C并同時打開排氣，使水沸騰以排除鍋內的冷空氣，待冷空氣完全排盡后，關上排氣，讓鍋內的溫度隨蒸氣壓力增加而逐漸上升；當鍋內壓力升到所需壓力時，維持壓力至所需時間。20min后，切斷電源或者關閉煤氣，讓滅菌鍋內溫度自然下降，當壓力表的壓力降至”0”時，打開排氣，旋送螺銓，打開蓋子，取出。將取出的滅菌培養基放入37°C溫箱培養。24h，經過檢查，若無菌生長，既可待用；
9.擱置斜面
將滅菌的試管培養基冷至50°C左右，將試管口端擱置在玻棒或其它合適高度的器具上，擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜；
高壓蒸汽滅菌
一、目的要求
1.了解高壓蒸汽滅菌的基本原理及應用范圍。
2.學習高壓蒸汽滅菌的操作方法。
二、基本原理
高壓蒸汽滅菌是將待滅菌的物品放在一個密閉的加壓滅菌鍋內，通過加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內的冷空氣從排氣閥中驅盡，然后關閉排氣閥，繼續加熱，此時由于蒸汽不能溢出，而增加了滅菌器內的壓力，從而使沸點增高，得到高于100℃
的溫度。導致菌體蛋白質凝固變性而達到滅菌的目的。
在同一溫度下，濕熱的殺菌效力比干熱大，其原因有三：一是濕熱中細菌菌體吸收水分，蛋白質較易凝固，因蛋白質含水量增加，所需凝固溫度降低（表Ⅵ-2），二是濕熱的穿透力比干熱大（表Ⅵ-3）；三是濕熱的蒸汽有潛熱存在，每1克水在100℃ 時，由氣態變為液態時可放出2.26kJ（千焦）的熱量。這種潛熱，能迅速提高被滅菌物體的溫度，從而增加滅菌效力。