固相化pH梯度雙向凝膠電泳實驗

人類腦脊液

乙醇NaOH增溶溶液β-巰基乙醇

離心管冷凍離心機超聲波儀

1.在室溫下解凍腦脊液樣品。當樣品解凍后，旋緊試管蓋，再用旋渦混合器振蕩試管。

2.樣品溶解時，在 15 ml 離心管及蓋上標記所處理樣品的名稱

3.將 1 ml 腦脊液和 9 ml 乙醇加人 15 ml 離心管中混合。

注意：腦脊液可能是生物危險品。將用過的吸頭、試管和手套放在適當的容器中，用 1mol/L NaOH 認真地清洗污染表面。

4.將離心管的蓋擰緊，振蕩，-20°C 儲存過夜。

5.5000 g 4°C，離心 5 min。

6.將上清倒入指定的廢物缸。在不吸出沉淀的前提下，用 200ul 吸頭盡可能轉移走剩余的乙醇，不讓吸頭接觸沉淀。

7.將離心管放在通風櫥在空氣中干燥 10~20 min，但不能讓沉淀徹底干燥。

8.在每個試管中加人 100ul 增溶溶液，加 24 泠巰基乙醇，旋緊試管上的蓋，用旋渦混合器振蕩試管，在室溫下放置 30 mm。

9.超聲處理樣品 30s。

10.5000 g、4°C，離心 5 min。

11.將每份上清液轉移到新試管中，檢測每份上清的蛋白質濃度。

蛋白質濃度會隨腦脊液樣品的不同而變化，但是使用 25W 的這種溶液，就能通過銀氨染色的雙向凝膠電泳有效檢測到蠻白質。

12.若樣品不立即用于 IEF，將其按每份 100ul 分裝，儲存在一 80°C。樣品的凍融只能進行一次，以避免多次反復凍融所產生的副作用。

13.繼續按方案 5 進行第一向 IEF。