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  • 發布時間:2022-10-31 10:14 原文鏈接: 變性梯度凝膠電泳技術的技術原理

    雙鏈DNA 分子在一般的聚丙烯酰胺凝膠電泳時,其遷移行為決定于其分子大小和電荷。不同長度的DNA 片段能夠被區分開,但同樣長度的DNA 片段在膠中的遷移行為一樣,因此不能被區分。DGGE/TGGE 技術在一般的聚丙烯酰胺凝膠基礎上,加入了變性劑(尿素和甲酰胺)梯度,從而能夠把同樣長度但序列不同的DNA 片段區分開來。

    一個特定的DNA 片段有其特有的序列組成,其序列組成決定了其解鏈區域(meltingdomain, MD)和解鏈行為(melting behavior) 。一個幾百個堿基對的DNA 片段一般有幾個解鏈區域,每個解鏈區域有一段連續的堿基對組成。

    當變性劑濃度逐漸增加達到其最低的解鏈區域濃度時,該區域這一段連續的堿基對發生解鏈。當濃度度再升高依次達到各其他解鏈區域濃度時,這些區域也依次發生解鏈。直到變性劑濃度達到最高的解鏈區域濃度后,最高的解鏈區域也發生解鏈,從而雙鏈DNA 完全解鏈。

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