在單位時間內有兩條波長不同的單色光以一定的頻率交替照射同一吸收池的溶液，然后經過檢測器和電子控制系統，計算出這兩個波長下吸收度的差值△A，與被測定物質的濃度成正比，這個方法稱雙波長分光光度法。
雙波長分光光度法的關鍵是正確選擇兩波長，要求被測組分合適。在兩波長處的QA足夠大，而干擾組分G和背景在兩波長應有相同的吸光度(DA =0)。
為滿足上述要求，一般是將a2選在待測組分的最大吸收波長，入是選在干擾組分等吸收波長。此法可測定渾濁樣品，也可測定吸收光譜相互重疊的混合物樣品，也是當雜質使主峰產生肩峰時測定主峰物質的較好定量方法。
橫波與縱波的波長
波長指沿著波的傳播方向，在波的圖形中兩個相對平衡位置之間的位移。橫波與縱波的波長所代表的意義是不同的。在橫波中，波長是指相鄰兩個相位相差
的點的距離，通常是相鄰的波峰、波谷或對應的過零點。在縱波中，波長是指相鄰兩個密部或疏部之間的距離。波長在物理中常表示為λ，國際單位是米（m）。
