1、雙波長分光光度法:
(1)原理
設兩個成分A、B,兩個波長1、2;
設要測定的成分為A,干擾成分為B;
設波長1為成分A的最大吸收波長,在此波長測A時,B也有吸收,則B可干擾A的測定。
解決辦法:再測波長2處的吸收,選擇波長2的前提是,成分B在波長1和波長2處的吸收相等。
這樣,同一個溶液,測定波長1和2處的吸光度,二者相減,即可將成分B的干擾減掉。
(2)具體測定
成分A的對照品溶液,測定波長1和2處的吸光度,求差值;
含成分A、B的供試品溶液,測定波長1和2處的吸光度,求差值;
按比耳定律分別列式,然后比較,即可測得供試品溶液中成分A的含量。
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2、差示分光光度法
(1)原理
分光光度法測定時,儀器讀數控制在0.3-0.7之間時,誤差最小;
但有時因所測成分濃度過度或吸收系數過大,測定時很容易超出0.3-0.7的范圍,導致較大誤差;
解決辦法:測定供試品溶液時,先測參比(注意:不用空白溶液作參比調儀器讀數至0,而用已知濃度的對照品溶液作參比調儀器讀數為0),再測供試品溶液。
(2)具體測定
先配一定濃度的對照品溶液,用作參比,調節儀器零點;
再切換到供試品溶液,讀出吸光度;
按比耳定律計算(注意此時公式中的濃度c為所測成分的供試品溶液濃度與對照品溶液濃度之差)。
另外注意:對照品溶液濃度究竟配多大,要根據所配供試品溶液來不斷地試,使儀器讀數控制在0.3-0.7之間。