1.實驗動物的選擇：選擇健康、產蛋率高的蛋雞，購進后飼養1周左右，觀察其健康情況。
2.抗原的準備：免疫抗原有多種選擇，一般采用滅活的病原體，也可以選擇激素類、蛋白類物質，使用前可以選用弗氏完全佐劑乳化抗原。
3.動物免疫：免疫方式主要有口鼻接種、皮內接種、皮下接種、肌肉注射、腹腔注射以及靜脈注射。禽類的免疫方式多用肌肉注射，接種中采用胸肌多點注射。使用弗氏完全佐劑充分乳化抗原。以商用雞新城疫滅活苗免疫為例，首次免疫的劑量可以控制在1~2 mL，抗原含量為0.3-0.5 mg/kg（30日齡的蛋雞免疫劑量為0.4 mg/次）2周后進行2次免疫，4周后第3次免疫之后每隔1個月可加強免疫1次。
4.免疫雞血清抗體效價檢測：一般使用瓊脂免疫擴散實驗檢測免疫雞血清中的抗體效價。將免疫蛋雞所用的抗原滴加于抗原孔，免疫雞血清滴加于抗體孔。抗原孔與抗體孔之間出現沉淀線者，為陽性。最高稀釋倍數血清孔出現沉淀線，即為該血清的抗體效價。一般效價達到1:64以上時，可開始收集免疫蛋雞所產雞蛋。
5.收集卵黃抗體：先用清潔水洗去蛋殼表面的糞污，再使用碘酊和酒精消毒。無菌條件下打開胚殼，傾出蛋黃至滅菌大燒杯中，以1:9的比例加入滅菌生理鹽水或0.01 mol/L pH7.2 PBS稀釋并充分混勻，調節pH至5.2，勻漿后的卵黃抗體可以進一步提純，也可加入0.01%硫柳汞或每毫升卵黃液加入青霉素、鏈霉素各1000單位進行防腐抑菌，搖勻后分裝于消毒好的瓶中，冷凍干燥保存或制成干粉利用。
6.IgY的純化：卵黃混合液反復凍融3次，6000 r/min離心30 min，分離出卵黃蛋白，加入終濃度0.07%的海藻酸鈉和0.02%的NaCl，振蕩，使海藻酸鈉充分溶解，靜置30 min，6000 r/min離心30 min，上清液調節pH到7.2，再依次用50%、33%、3%的飽和硫酸銨（pH 7.2）提取IgY，用 SephadexG-25脫鹽。