單克隆抗體的純化_抗原葡聚糖和抗鼠1g葡聚糖進行純化

當所希望制備的抗體不能與葡萄球菌蛋白A有效地結合時（如IgM和一些IgG1抗體），可以用親和層析柱來進行制備，柱子裝填的介質是偶聯上蛋白抗原或者抗鼠Ig的CNBr活化葡聚糖。這種抗原-葡聚糖將用于分離特異性的抗體，而抗鼠 Ig-葡聚糖用于分離所有的鼠免疫球蛋白。

腹水（單克隆抗體）

CNBr 活化葡聚糖 4B (Amersham Pharmac1a B1otech)1 mmol L HCl 偶聯緩沖液蛋白質抗原或抗鼠Ig的抗體（可購買獲得）1 mol L 乙醇胺 pH 8.0 的 PBS洗滌緩沖液 60 mL或者150 mL的玻璃砂芯漏斗 中等孔徑。

1)將3.3 g CNBr活化葡聚糖4B溶脹于1 mmol/L HCl中（可得10 mL溶脹的凝膠）， 然后轉移至玻璃砂芯漏斗中，并用：（a) 200-500 mL 的1 mmol/L HCl； (b) 200- 500 mL偶聯緩沖液。依次洗滌>30 min。

2)將葡聚糖凝膠轉移至 50 mL 錐形塑料離心管中，加 50-100 mg 的配體（2-5 mg/mL), 混勻后置搖動平臺 4℃ 過夜。250 g離心 10 min, 棄上清。

3)加偶聯緩沖液至滿管，離心，棄上清。

4)加 20-40mL 1 mol/L pH 8.0 的乙醇胺，置搖動平臺 4℃ 4-5 h, 離心，棄上清。

5)在管中依次加滿 PBS 和洗滌緩沖液洗滌，每次洗后離心。

6)將葡聚糖凝膠轉移到一個2.5 cm 的玻璃柱中，用 100 mL 的 PBS 平衡。

7)腹水液稀釋于 3 倍體積的 PBS 后上柱，流速為 1-5 mL/min，在室溫下操作。

用 30 mL的 PBS 從柱子上洗去未結合的蛋白質。

8)用甘氨酸?Cl 緩沖液洗脫結合蛋白質，分析、濃縮