HPLC使用的色譜柱是很細的(1~6 mm)，所用固定相的粒度也非常小（幾μm到幾十μm)，所以流動相在柱中流動受到的阻力很大，在常壓下，流動相流速十分緩慢，柱效低且費時。為了達到快速、高效分離，必須給流動相施加很大的壓力，以加快其在柱中的流動速度。為此，須用高壓泵進行高壓輸液。高壓、高速是高效液相色譜的特點之一。HPLC使用的高壓泵應滿足下列條件：
a. 流量恒定，無脈動，并有較大的調節范圍（一般為1~10 mL/min)；
b. 能抗溶劑腐蝕；
c. 有較高的輸液壓力；對一般分離，60×10^5Pa的壓力就滿足了，對高效分離，要求達到150~300×10^5Pa。
⑴往復式柱塞泵
當柱塞推入缸體時，泵頭出口（上部）的單向閥打開，同時，流動相進入的單向閥（下部）關閉，這時就輸出少量的流體。反之，當柱塞向外拉時，流動相入口的單向閥打開，出口的單向閥同時關閉，一定量的流動相就由其儲液器吸入缸體中。這種泵的特點是不受整個色譜體系中其余部分阻力稍有變化的影響，連續供給恒定體積的流動相。
⑵氣動放大泵
其工作原理是：壓力為 p1 的低壓氣體推動大面積（ SA ）活塞A ，則在小面積（ SB ）活塞 B 輸出壓力增大至 p2 的液體。壓力增大的倍數取決于 A 和 B 兩活塞的面積比，如果 A 與 B 的面積之比為 50 : 1 ，則壓力為 5 × Pa 的氣體就可得到壓力為 250×Pa 的輸出液體。這是一種恒壓泵。