一抗孵育溫度有幾種:4度、室溫、37度,其中4度效果最佳;孵育時間與溫度、抗體濃度有關,一般37度1-2h,4度過夜(從冰箱拿出后37度復溫45min)。具體條件還要摸索。二抗一般室溫或37度30min-1h,濃度一般有工作液,若是濃縮液還要摸索濃度。