免疫沉淀的培養細胞的裂解實驗_單層培養的細胞的裂解

培養的動物細胞一般使用溫和去垢劑來裂解。如果低濃度的去垢劑就能引起細胞的充分裂解（如1%NP-40或1%TritonX-100)，那么這對目標蛋白的影響可能比勻漿方法更溫和。去垢劑的選擇必須根據免疫沉淀所用的抗體的識別表位的性質來決定。

單層細胞或懸浮細胞

裂解緩沖液PBS

離心機

①去掉培養基，并用冷PBS洗細胞2次。

②把培養瓶置于冰上。

③100mm的培養瓶（預冷至4℃)中加入10ml裂解緩沖液，裂解緩沖液的體積應根據培養瓶的大小來調整。

④冰上孵育細胞10?30min(取決于所孵育的細胞系），并不時地搖動瓶子。

⑤在冰上傾斜瓶子，使緩沖液流向一邊，用吸管將裂解液轉移到一個微量離心管或其他合適的離心管中。其他培養瓶均如此操作。有些研究者喜歡把細胞從培養瓶中刮下來，但這可能產生細胞張力，只在特殊情況下使用。

⑥4℃條件下20000g離心裂解液10min。

⑦小心地把上清移到另一個試管中，應確保不要碰到沉淀物。將裂解液放置于冰上，以備免疫沉淀所用。細胞裂解液可以使用干冰和乙醇的混合物迅速冰凍，-70℃條件下可以長期儲存。但是，通過免疫沉淀分離的蛋白復合物的分析，建議使用新制備的細胞裂解液。