免疫親和柱熒光計快速測定法
(1)試劑與設備
①4-系列真菌毒素專用熒光計。
②均質器(250mL)。
微量移液器(0.5mL)。
渦流混合器。
⑤塑料注射器(60mL)。
⑥VICAM T-2毒素親和柱。
⑦聚乙二醇(PEG),相對分子質量8000。
色譜級甲醇。
⑨PBS緩沖液。
⑩氯化鈉。
?VICAM T-2毒素衍生液。
?VICAM T-2毒素標定用溶液(紅色)。
?0.02%吐溫/PBS 緩沖液:0.1mL 吐溫+9.99mL PBS 緩沖液+490mL 水。
(2)樣品的提取與過濾
①稱取50g 樣品、5g 氯化鈉、10g PEG 置于均質杯中。
加入150mL 25%的甲醇,高速均質1min。
③用折疊式濾紙過濾,用干凈的燒杯收集25mL的濾液。
④用25mL 的水將濾液稀釋1倍。
⑤將 T-2毒素親和柱與60mL 塑料注射器筒相連。
⑥將40mL T-2毒素標定用溶液加入至塑料注射器筒中。
(3)樣品的制備與培養
①在塑料注射器筒中加入0.5mL 的T-2毒素衍生液。
②將塑料注射器筒從操作架上取下,用硅橡膠塞子塞好,翻轉混合4～5次,然后再置于操作架上。
(4)色譜柱分離操作與測定
①將空氣泵與親和柱相連,使注射器中的溶液以1～2滴/秒的速度通過親和柱。
②用0.02%吐溫/PBS 緩沖液以1～2滴秒的速度通過親和柱。
③用2mL 色譜級的甲醇以1滴/秒的速度通過親和柱,濾液收集于測試管中。
④將測試管置于熒光計中進行測定。
⑤檢測限:0.15mg/kg,測定范圍0～5.0mg/kg。