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  • 發布時間:2019-06-27 18:29 原文鏈接: 人sTRAILRELISA試劑盒

    sTRAIL R ELISA試劑盒

     (用于血清、血漿、細胞培養上清液和裂解物及唾液其它生物體液內)

     

    原理

    本實驗采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗人 sTRAIL R 單抗包被于酶標板上,標準品和樣品中的 sTRAIL R與單抗結合,加入生物素化的抗人sTRAIL R,形成免疫復合物連接在板上,辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結合,加入底物工作液顯藍色,最后加終止液硫酸,在450nm處測OD值,sTRAIL R濃度與OD值成正比,可通過繪制標準曲線求出標本中sTRAIL R濃度。

    試劑盒組成2-8℃保存)

    酶標Coated Wells

    96

    酶標抗體工作液(Enzyme Conjugate

    12ml

    10×標本稀釋液(Sample Buffer

    12ml

    20×濃縮洗滌液(Wash Buffer

    50ml

    標準品Standards4ng/

    2

    底物工作液(TMB Solution

    12ml

    第一抗體工作液(Biotinylated Antibody

    12ml

    終止液Stop Solution

    12ml

    準備試劑與收集血樣

    1. 收集標本:血清、血漿(EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8保存48小時;更長時間須冷凍(-20 -70 )保存,避免反復凍融。

    2. 標準品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成4000pg/ml的溶液設標準8管,管加入標本稀釋液200ul。在第一管中加入4000pg/ml的標準品溶液200ul混勻后用加樣器吸出200ul,移至第二。如此反復作對倍稀釋,從第七中吸出200ul棄去。第八為空白對照。

    3. 10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。

    4. 洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)

    檢測程序

    1. 加樣:每孔各加入標準品或待測樣品100ul,將反應板充分混勻后置37120分鐘。

    2. 洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。

    3. 每孔中加入第一抗體工作液100ul。將反應板充分混勻后置3760分鐘。

    4. 洗板:同前。

    5. 每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置3730分鐘。

    6. 洗板:同前。

    7. 每孔加入底物工作液100ul,置37 暗處反應15分鐘。

    8. 每孔加入100ul終止液混勻。

    9. 30分鐘內用酶標儀在450nm處測吸光值。

    結果計算與判斷

    1. 所有OD值都應減除空白值后再行計算。

    2. 以標準品2000100050025012562.531.2pg/ml為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上作圖,畫出標準曲線。

    3. 根據樣品OD值在該曲線圖上查出相應sTRAIL R含量。

    試劑盒性能

      1.   靈敏度最小的sTRAIL R 檢測濃度小于15pg/ml

    2. 特異性:可同時檢測重組或天然的人sTRAIL R不與人其它細胞因子有交叉反應。

    3. 重復性:板內、板見變異系數均小于10%。

    注意事項

      1.   以上標準孔及待樣品均建議做復孔,每次測定應同時標準曲線。

     2.   洗滌過程很關鍵。洗滌不充分將導致精確度誤差及OD值錯誤地升高。

      3.   板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥

      4.   本試劑盒宜置4oC冰箱保存。

     5.   本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷!



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