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  • 發布時間:2021-06-23 15:39 原文鏈接: 上轉發光法技術

    1.上轉發光法定量與膠體金方法的區別

    上轉發光法原理:上轉發光免疫分析儀是一種基于上轉換發光技術(UPT)的光電檢測儀器,通過對利用上轉換發光材料(UCP)作為標記物的免疫層析試紙條上的UCP顆粒的分布狀態進行測量、分析與處理,給出樣品中目標被檢物的濃度。做到對待側樣本的快速、準確定量檢測。

    在上轉發光免疫分析儀的具體工作過程中,首先激光器發射紅外光,紅外光照射到與檢測卡結果掃描窗對應的分析膜部分(包括檢測帶與質控帶);分析膜上存在的UCP顆粒受紅外光激發產生可見光,照射于光電倍增管上,光信號轉換成電壓值;便得到與試紙條某一具體位置上UCP顆粒存在量對應的檢測信號值;在此基礎之上,通過多功能采集卡驅動電機,使檢測卡隨滑動平臺滑動,從而得到與檢測卡分析膜上間隔固定的每一個位置對應的檢測信號值,即實現以UPT免疫分析儀對檢測卡進行掃描檢測。最終的結果以具體數值以及掃描曲線的形式給出。

    膠體金免疫層析技術原理:將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上,膠體金標記試劑(抗體或單克隆抗體)吸附在結合墊上,當待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上后,通過毛細作用向前移動,溶解結合墊上的膠體金標記試劑后相互反應,再移動至固定的抗原或抗體的區域時,待檢物與金標試劑的結合物又與之發生特異性結合而被截留,聚集在檢測帶上,可通過肉眼觀察到顯色結果。

    區別:上轉發光法試紙條反應后無顏色變化,肉眼無法判讀,必須通過接收器接收測試卡上激發出的可見光信號,光信號轉化成電壓值,最終轉換為濃度,是屬于發光技術。

    膠體金試紙條反應后會有顏色變化,且顏色變化有深有淺。可通過肉眼或機器判讀其顏色變化,從而定性檢測。屬于傳統的檢測技術。

    2.上轉發光免疫分析儀及配套試劑的質控

    以fFN項目舉例說明:

    胎兒纖維連接蛋白(fFN)定量測定試劑盒(上轉發光法)應用雙抗體夾心免疫層析法。試紙條上的NC膜上反應區(T線)用胎兒纖維連接蛋白(fFN)抗體包被,質控區(C線)用羊抗鼠包被。測試時,將標本和稀釋液滴入試紙條加樣處上,液體在毛細管效應下向上層析。標本中的fFN在層析過程中先與UCP標記的抗fFN抗體結合,然后繼續往上層析,隨后結合物會被包被在T線上的fFN抗體結合,在T線位置會形成固相FFN抗體-抗原-標記fFN抗體-UCP顆粒復合物。在C線則形成固相羊抗鼠-標記fFN抗體-UCP顆粒復合物。UCP顆粒在激發光下發出可見光信號,T線信號和C線信號的比值(T/C)與樣本中的fFN抗原濃度成正比,用校準品的T/C值和濃度作標準曲線,從標準曲線上可求出待測樣本中的fFN的含量。

    也就是說,通過上轉發光免疫分析儀測得的有兩個可見光信號,分別是C線(質控品)信號和T線(測試品)信號。T線信號和C線信號的比值(T/C)與樣本中的fFN抗原濃度成正比。所以在儀器屏幕上能看到的有兩個峰,由于質控品的濃度是固定的,所以通過T/C值即可計算出測試品濃度,最終顯示在儀器界面上。

    測試卡內自帶有參數卡(芯片),可自動識別當前檢測項目名稱、單位、線性范圍等信息。

    其他項目的檢測原理基本與此一直,只是測試卡內所包被的抗體不一樣。


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